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常見細胞培養試劑的配制方法分享
發布時間: 2021-09-23 點擊次數: 3081次培養用液是維護組織細胞生存、生長及進行細胞培養各項操作過程中所需的基本溶液。常用的細胞培養試劑包括:超純水,平衡鹽溶液,消化液,PH調整液,谷氨酰胺溶液,抗生素溶液。
常見的超純水
1. 使用純水機純化而來;
2. 蒸餾水和離子交換水
3. 三蒸水
平衡鹽溶液1、平衡鹽溶液主要由無機鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細胞滲透壓平衡,保持pH穩定及提供簡單的營養。主要用于取材時組織塊的漂洗、細胞的漂洗、配制其他試劑等。
2、D-Hank’s與Hank’s的一個主要區別在于前者不含有Ca2+、Mg2+,因此D-Hank’s常用于配制胰酶溶液。
3、配制平衡鹽溶液也應當用三蒸水。如果配方中含有Ca2+、Mg2+,應當首先溶解這些成分。配好的平衡鹽溶液可以過濾除菌或高溫高壓滅菌.
幾種常見的平衡鹽溶液配方:品名(單位:g/L) PBS Hank‘s D-Hank‘s NaCl 8 8 8 KCl 0.2 0.4 0.4 CaCl2 - 0.14 - MgCl26H2O - - - MgSO47H2O - 0.2 - Na2HPO4H2O 1.56 0.06 0.06 NaH2PO42H2O - - - KH2PO4 0.2 0.06 0.06 NaHCO3 - 0.35 0.35 葡萄糖 - 1 - 酚紅 - 0.02 0.02 消化液
(1)以配制250ml0.25%DEDTA的胰酶為例,稱取胰蛋白酶粉末0.625g置燒杯中,先用少許D-Hanks 或PBS平衡鹽溶液(pH7.2 左右)調成糊狀,然后再補足D-Hanks 平衡鹽溶液,并不斷攪拌振蕩直到攪拌混勻,置室溫4 小時或冰箱過夜;
(2)次日,先用濾紙粗濾,再進行過濾除菌,定容至250ml,分裝于鹽水瓶或三角瓶,低溫冰箱保存備用,胰酶常用濃度為0.25% 或0.125%。
胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健,除去細胞間粘蛋白及糖蛋白,影響細胞骨架,從而使細胞分離。
胰蛋白酶液濃度越高,作用越強,但超過一定限度會損傷細胞。
胰蛋白酶是一種黃白色粉末,用無Ca2+、Mg2+的PBS緩沖液配制常用的胰蛋白酶液濃度是0.25% 。用濾器過濾除菌。
胰蛋白酶液消化時間:2-10分鐘,用含血清培養液終止其對細胞的消化作用。
pH調整液
常用的有HEPES液和NaHC03溶液
1.NaHC03溶液:NaHC03是培養基中必須添加的成分,一般情況下是按照說明書的要求準確添加,以保證培養基在5%CO2的環境下pH達到設計標準。
2.HEPES液:HEPES是一種弱酸,中文名稱是羥乙(乙)基哌(派)嗪乙硫磺酸。HEPES對細胞無毒性,主要作用是防止培養基pH迅速變動
100X的Hepes配制:取23.8g的HEPES溶于90ml的雙蒸水中 ,用1N的NAHCO3調PH至7.8-8.0之間,過濾除菌,定容至100ml.
谷氨酰胺補充液:
谷氨酰胺在細胞代謝過程中起重要作用,合成培養基中都要添加,由于谷氨酰胺容易降解,所以都是在使用前添加。谷氨酰胺使用終濃度為0.002mol/L。
一般配制為100倍濃縮液,配制時應加溫至30℃,*溶解后過濾除菌,分裝至小瓶,儲存于-20℃。
抗生素溶液:
常用的是青鏈霉素,俗稱“雙抗溶液"。
青霉素主要對革蘭陽性菌有效,鏈霉素主要對革蘭陰性菌有效。加入這兩種抗生素可預防絕大多數細菌的污染。
青霉素使用的終濃度為100000U/L,鏈霉素使用的終濃度為0.1g/L。一般配制成100倍濃縮液,可用PBS或培養基配制。
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